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單細胞測序技術服務 靶向lncRNA单细胞全转录组测序 單細胞全轉錄組測序 |
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生物分子凝聚體研究 HyPro靶RNA临近标记技术 |
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RNA-蛋白相互作用 HyPro - MS CHIRP – MS RNA pull-down MS |
RNA-RNA/DNA相互作用 HyPro-seq/芯片 CHIRP-seq |
蛋白-RNA相互作用 AGO APP seq/芯片 RIP-RNA seq/芯片 |
蛋白-蛋白相互作用 RIME MS CoIP-MS |
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NGS测序技术服务 R-loop 测序分析服务 |
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NGS测序技术服务 環狀DNA测序 |
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基因芯片技術服務 Small RNA修饰芯片 m6A单碱基分辨率芯片 mRNA&lncRNA表观转录组芯片 circRNA表观转录组芯片 |
NGS测序技术服务 表觀轉錄組學測序服務 RNA m6A甲基化测序（MeRIP Seq） |
LC-MS mRNA碱基修饰检测 tRNA碱基修饰检测 |
PCR技术服务 MeRIP-PCR技术服务 m6A绝对定量RT-PCR技术服务 m6A单碱基位点PCR（MazF酶切法）技术服务 |
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Ribo-seq Ribo seq |
核糖體-新生肽链复合物(RNC) RNC联合 circRNA芯片 RNC联合 lncRNA芯片 RNC联合mRNA-seq |
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蛋白表達定量 Label free非标定量技术 TMT标记定量技术 PRM靶向定量 |
當前的研究發現，很大一部分m6A修飾發生在含有核心ACA序列的保守motif區域，通常称为是m6ACA位點。给我免费播放片高清在线观看生物丨數譜生物提供對RNA上潛在m6ACA位點進行檢測或驗證的技術服務——m6A单碱基位点PCR（MazF酶切法）。
RNA內切酶MazF識別RNA單鏈並在非甲基化的ACA位點的5’端進行切割，而不能切割甲基化的m6ACA位點(圖1)。
圖 1. MazF可以在非甲基化ACA位點切割，而无法在甲基化m6ACA位點發揮作用
將抽提的總RNA樣本分爲兩份，一份不加MazF處理，另一份加MazF處理後。然後通過實時定量PCR技術進行檢測（圖2）。最後，經過數據分析處理得到檢測的樣品中特定ACA位點的m6A甲基化水平。
圖2. m6ACA位點PCR檢測（MazF酶切法）實驗原理
mRNA&lncRNA m6ACA位點檢測：RNA m6ACA位點預測→total RNA提取&質檢→一份MazF酶處理，一份不加MazF酶處理→反轉錄成cDNA→目標m6ACA位點PCR檢測
CircRNA m6ACA位點檢測：RNA m6ACA位點預測→total RNA提取&質檢→RNase R消化線性RNA，保留circRNA→ 一份MazF酶處理，一份不加MazF酶處理→反轉錄成cDNA→目標m6ACA位點PCR檢測
●對m6A单位点的相对定量检测
●對m6A位点高度敏感的核糖核酸内切酶MazF
●通過嚴格測試的特異性引物
樣本類型：新鲜组织、细胞或total RNA
樣 本 量：
mRNA&lncRNA m6ACA位点检测：：≥2μg total RNA或者能获得相应份量的组织细胞，最低浓度不低于50ng/μl。
CircRNA m6ACA位点检测：≥10μg total RNA或者能获得相应份量的组织细胞，最低浓度不低于50ng/μl。
樣品質量：A260/A280为1.9~2.2；无基因组DNA污染；RNA无降解。
樣本運輸：RNA样品使用RNAase-Free离心管保存，封口膜封口后干冰运输；组织细胞样品RNAase-Free冻存管保存，干冰或液氮运输。
m6ACA位點PCR（MazF酶切法）可对单个m6ACA修飾位點進行檢測（以下为示例展示）。
|
sample |
MazF-(Ct) |
MazF+ (Ct) |
Methylation ratio % |
|
1 |
22.970 |
23.354 |
76.611 |
|
2 |
22.968 |
23.854 |
54.101 |
|
3 |
22.980 |
24.774 |
28.856 |
|
4 |
23.033 |
27.340 |
5.051 |
|
5 |
23.006 |
28.308 |
2.535 |
|
6 |
23.008 |
30.821 |
0.452 |
