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單細胞測序技術服務 靶向lncRNA单细胞全转录组测序 單細胞全轉錄組測序 |
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生物分子凝聚體研究 HyPro靶RNA临近标记技术 |
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RNA-蛋白相互作用 HyPro - MS CHIRP – MS RNA pull-down MS |
RNA-RNA/DNA相互作用 HyPro-seq/芯片 CHIRP-seq |
蛋白-RNA相互作用 AGO APP seq/芯片 RIP-RNA seq/芯片 |
蛋白-蛋白相互作用 RIME MS CoIP-MS |
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NGS测序技术服务 R-loop 测序分析服务 |
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NGS测序技术服务 環狀DNA测序 |
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基因芯片技術服務 Small RNA修饰芯片 m6A单碱基分辨率芯片 mRNA&lncRNA表观转录组芯片 circRNA表观转录组芯片 |
NGS测序技术服务 表觀轉錄組學測序服務 RNA m6A甲基化测序（MeRIP Seq） |
LC-MS mRNA碱基修饰检测 tRNA碱基修饰检测 |
PCR技术服务 MeRIP-PCR技术服务 m6A绝对定量RT-PCR技术服务 m6A单碱基位点PCR（MazF酶切法）技术服务 |
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Ribo-seq Ribo seq |
核糖體-新生肽链复合物(RNC) RNC联合 circRNA芯片 RNC联合 lncRNA芯片 RNC联合mRNA-seq |
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蛋白表達定量 Label free非标定量技术 TMT标记定量技术 PRM靶向定量 |
N6-甲基腺嘌呤（m6A）是RNA中丰度最高的轉錄後修飾，在生物学过程中扮演重要角色。很多研究发现，各类RNA上單個m6A即可發揮重要功能。由于缺乏在精确位点鉴定m6A修飾的高靈敏度方法，使得m6A的功能研究很大程度上仍未得到探索。新研究发现，T3 DNA連接酶對m6A修飾有高度的敏感性。在此基础上，我们建立了一种高灵敏的絕對定量的實時熒光定量PCR定量分析方法，可以在单核苷酸分辨率水平上准确检测RNA中m6A修飾位點, 并对未知模板進行定量分析。该方法可成功地应用于实际生物样品中m6A修飾的精確檢測，即使是低丰度RNA的樣本。
给我免费播放片高清在线观看生物丨数谱生物为您提供m6A绝对定量实时定量PCR技术服务，您只需要提供保存完好的组织或细胞标本，本公司专业的技术服务人员就可替您完成绝对定量的实时定量PCR实验操作和数据分析，提供给您完整的实验报告。
每微克 total RNA target 1 RNA拷貝數=X
如果知道細胞的數量爲106，总RNA爲15ug，则每个细胞的target 1的拷貝數爲：（X×15）/ 106
1. 引物設計、合成
設計併合成目的分子的特異性探針。
2. 樣品RNA抽提
a. 若實驗對象爲組織樣品，取适量（50-100mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），匀浆后抽提RNA。
b. 若實驗對象爲細胞樣品，每份样品取1×106～1×107細胞，完全吸去培养液后加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），裂解后抽提RNA。
3. RNA質量檢測
a．紫外吸收测定法测定RNA在波長260nm和280nm的吸收值，获得RNA的濃度並通過A260/280及A260/230的吸收比值判斷RNA的純度。
b．甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA純度和完整性。
注：用于实时定量PCR檢測的RNA樣品，必须高纯度、完整，没有RNase 污染（降解的样品不能用于实时定量PCR檢測），同时提取方法必须保证所得样品包含完整的小RNA部分。
4. 連接反應
每個樣品我們加入已知濃度的RNA（RNA Spike-in），使用连接酶连接特异性探针。
5. 實時定量PCR
連接反應後在管中加入標準品與連接產物一同作爲模板進行實時定量PCR擴增，，根据Ct值製備標準曲線。
6. 分析結果、提供实验报告
各樣品的目的基因和標準品分別進行Realtime PCR反應。根据標準品繪製標準曲線，各样品目的基因總cDNA濃度、目的基因位點未m6A甲基化cDNA濃度和RNA Spike in的cDNA濃度結果直接由機器生成。【（每個樣品的目的基因總cDNA濃度-目的基因位點未m6A甲基化cDNA濃度）x RNA Spike in的RNA濃度】除以RNA Spike in的cDNA濃度濃度，即为此样品此目的基因位點m6A甲基化校正後的RNA含量。
