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    靶向lncRNA单细胞全转录组测序

    • 簡介
    • 實驗原理
    • 實驗優勢
    • 送樣要求
    • 結果展示
    • 長鏈非編碼RNAlong non-coding RNAlncRNA)是一类长度大于200nt,没有蛋白质编码能力,或只能编码短肽的RNA分子。在过去的几十年中,研究者们逐渐认识到lncRNA的重要性,发现lncRNA在細胞分化、生长发育、免疫应答、基因转录调控、RNA加工修飾等方面具有重要的調節作用[1-4]。然而,由于lncRNA的丰度普遍較低,一般只有mRNA的十分之一左右[5]。传统的测序技术包括单细胞测序技术在低丰度转录本(比如lncRNA)的检测上存在灵敏度不高和检测不准确等问题,在测序建库过程中,对低丰度的转录本进行特异性的靶向扩增,则可以实现对这些转录本更灵敏、更准确的检测。为此,我们设计了针对lncRNA的靶向panel,包含315個和148個已報道的,与人或小鼠生物学功能或疾病相关的功能性lncRNA。在单细胞测序建库过程中,使用lncRNA靶向panel對功能性lncRNA分子進行多重PCR擴增,极大的提高了lncRNA的檢測靈敏度和準確性,使得在单细胞水平分析低丰度、功能性lncRNA表達情況成爲可能。此外,如果您有其它感兴趣的lncRNAmRNA,我司为您提供个性化panel定製服務,可以为您设计特异性强的靶向扩增引物,与靶向lncRNA panel一起完成靶向擴增過程。

    • 引入頗受行業內認可的BD RhapsodyTM單細胞分析系統,可快速平行分析成千上万个单细胞内数千基因的表达水平。该系统利用微孔法进行单细胞的分离和标记,一张微孔板上有不少于20萬的特定大小微孔,每一个微孔可捕获一个细胞并装载一个磁珠,之后进行细胞裂解、cDNA合成、靶向lncRNA擴增和文庫構建。



      1. 靶向lncRNA單細胞測序流程圖。



      2. 靶向lncRNA擴增流程與文庫構建。


      參考文獻

      1Fatica A, Bozzoni I: Long non-coding RNAs: new players in cell differentiation and development. Nat Rev Genet 2014, 15(1):7-21.[PMID: 24296535]

      2Chen YG, Satpathy AT, Chang HY: Gene regulation in the immune system by long noncoding RNAs. Nat Immunol 2017, 18(9):962-972.[PMID: 28829444]

      3Statello L, Guo CJ, Chen LL, Huarte M: Gene regulation by long non-coding RNAs and its biological functions. Nat Rev Mol Cell Biol 2021, 22(2):96-118.[PMID: 33353982]

      4Herman AB, Tsitsipatis D, Gorospe M: Integrated lncRNA function upon genomic and epigenomic regulation. Mol Cell 2022, 82(12):2252-2266.[PMID: 35714586]

      5Liu SJ et al: Single-cell analysis of long non-coding RNAs in the developing human neocortex. Genome Biol 2016, 17:67.[PMID: 27081004]




    • 靈敏度高:對低丰度、功能性lncRNA進行更靈敏、更准确的检测

      準備工作簡單:客戶只需浸沒組織樣本或提供單細胞懸液寄到我司即可

      極高的捕獲率:充分利用實驗樣本並獲取有效實驗數據

      既包括常規scRNA-seq的檢測分析又包含靶向lncRNA或任何關注的RNA的檢測分析
      提供完整和個性化的數據分析方案

    • 樣品類型:組織100-200mg,单细胞悬液细胞数目不少于1×105個;

      質控要求:活細胞比例一般不低於65%
      樣品保存和運輸:浸沒組織0-4℃保存,冰袋运输;单细胞悬液-80℃保存,干冰运输;
      其他詳見《给我免费播放片高清在线观看生物|數譜生物單細胞測序預處理指南》。

    • 1、细胞类群/亞羣鑑定t-SNE



      2細胞類羣/亞羣marker mRNA或靶向lncRNA分佈圖




      3細胞類羣/亞羣marker mRNA或靶向lncRNA小提琴圖




      4靶向lncRNA在不同細胞類型裏的表達量



      5靶向lncRNA在不同細胞類型裏的富集度