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    RIME MS

    • 簡介
    • 技術優勢
    • 技術路線
    • 結果展示
    • 案例展示
    • RIME MS (Rapid immunoprecipitation mass spectrometry of endogenous proteins)服务旨在深入分析蛋白质在染色质和转录因子-转录辅因子复合物中的相互作用。这种高效的技术特别适合检测细胞核内蛋白质之间的相互作用,能够与ChIP-seq平行使用,为基因表达调控机制提供重要见解。


      爲什麼選擇RIME MS服务
      · 揭示蛋白質功能和調控機制:通過將蛋白質作爲完整複合物的一部分進行純化和分析,RIME MS技术能够揭示其功能和调控机制,帮助理解特定相互作用蛋白的生物学相关性。
      · 支持轉錄因子研究:轉錄因子(TFs)识别特定的DNA序列来控制染色质和转录,是基因表达调控的重要元素。研究表明,除了TF-DNA结合外,TFs与转录辅因子(TcoFs)的相互作用也是促进转录调控的重要组成部分。
      · 填補研究空白:目前對TFs与TcoFs之间的关联研究相对较少。我们的RIME MS服务填补了这一空白,通过分析这些相互作用,帮助研究人员深入了解转录调控的复杂网络。
      · 推動科學發現和應用:通過揭示染色質蛋白質-蛋白质相互作用的详细信息,我们的服务为基础研究、药物开发和疾病治疗提供了宝贵的数据支持。




    • 特異性提取核蛋白:專門適用於研究核內的轉錄因子-转录辅因子复合物及染色质相关复合物的蛋白质。
      快速測定:整個分析方案可在2-3天内完成,加速研究进程。
      高靈敏度檢測:能夠檢測低親和力和瞬時結合的相互作用,并最大限度地减少人工相互作用的检测,从而提供最相关的蛋白质相互作用鉴定。
      多樣化樣本適用可對組織和細胞樣本進行分析,更适合与ChIP-seq联合研究。
      無需額外操作:無需轉染、表位标记或其他额外操作,简化实验流程,提高数据可靠性。
    • · 样品准备:交聯並裂解細胞,提取高纯度核蛋白。
      · 免疫沉澱:使用特異性抗體對目標蛋白質及其複合物進行免疫沉澱,捕获相关蛋白质。
      · 質譜分析:利用高分辨率質譜儀對免疫沉澱的樣品進行詳細分析,鉴定并定量靶蛋白的直接和间接相互作用蛋白质组。
      · 數據解析:通過先進的生物信息學工具和數據庫,对质谱数据进行深入解析,揭示蛋白质-蛋白质相互作用网络。
      · 結果報告:提供詳細的分析報告,包括识别的蛋白质、相互作用网络图及其在转录调控中的潜在作用,帮助研究人员进一步理解和应用这些发现。

      图1 RIME-MS实验流程[1]

    • 1.RIME-MS特异性富集的蛋白列表:


      2.RIME-MS特异性富集的蛋白GO/pathway分析


      3. RIME-MS特异性富集蛋白PPI互作网络图


    • 雌激素受體α(ER)在大多数乳腺癌中是主导的转录因子,其相关蛋白质能影响药物反应,但直接识别相互作用蛋白质的方法一直受到限制。文章利用RIME-MS的方法纯化内源ER蛋白,并在乳腺癌细胞中发现了激动剂和拮抗剂结合条件下的相互作用组,揭示了乳腺癌中的转录网络。RIME-MS结果显示,富含雌激素的ER最主要的相互作用蛋白是GREB1,研究表明,GREB1是染色质结合的ER共激活因子,对于ER介导的转录至关重要,它稳定了ER与其他辅因子之间的相互作用。文章展示了异种移植瘤中的GREB1-ER相互作用,发现在一半的ER+原发性乳腺癌中存在GREB1-ER相互作用,并预示着良好的临床结局。这些发现揭示了GREB1作为一个雌激素特异性ER辅因子的重要作用,可作为乳腺癌对药物敏感的潜在生物标志物[2]。


      圖2 RIME实验证明乳腺癌中ER结合GREB1

      參考文獻 
      1.Mohammed, Hisham et al. “Rapid immunoprecipitation mass spectrometry of endogenous proteins (RIME) for analysis of chromatin complexes.” Nature protocols vol. 11,2 (2016): 316-26. doi:10.1038/nprot.2016.020.[ PMID: 26797456]
      2.Mohammed, Hisham et al. “Endogenous purification reveals GREB1 as a key estrogen receptor regulatory factor.” Cell reports vol. 3,2 (2013): 342-9. doi:10.1016/j.celrep.2013.01.010. [PMID: 23403292]