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    AGO APP smallRNA芯片

    • 簡介
    • 技術優勢
    • 實驗原理和流程
    • 結果展示
    • AGO APP smallRNA芯片服务利用特异性结合AGO1-4蛋白的T6B肽段偶联GST磁珠富集结合AGO蛋白的smallRNA,包括miRNA、tsRNA、Agotron、sdRNA等,进行smallRNA芯片筛选,从而获得结合AGO蛋白调控RNA稳定性和翻译的smallRNA。

      Argonaute (AGO)蛋白是一类庞大的蛋白质家族,包含AGO1-4,是组成RISCs(RNA-induced silencing complex )复合物的主要成员[1]。AGO蛋白的经典功能是AGO2在细胞质中装载miRNA形成RISC复合物,并介导miRNA通过序列互补配对结合靶基因mRNA 3’UTR,促进mRNA降解或蛋白翻译抑制。AGO蛋白-smallRNA的复合物可以分泌到体液中并稳定存在,作为潜在的疾病诊断的生物标志物。



      图1. 血浆外泌体之外结合AGO2稳定存在的miRNA[2]



    • u  AGO APP可同时富集AGO1/2/3/4蛋白结合的smallRNA进行检测;

      u  AGO APP使用的T6B-coupled beads与Ago亲和性高,且检测物种更广泛(从昆虫到人都可检测);

      u  AGO APP smallRNA芯片能检测miRNA、tsRNA、Agotron等多种smallRNA,覆盖范围广;

      u  芯片探針檢測特異性高,操作簡單,样本需求量少。

       

      參考文獻:

      [1] Iwakawa HO, et al. Mol Cell. 2022. PMID: 34942118

      [2] Arroyo, Jason D et al. PNAS. 2011. PMID: 21383194

    • 實驗原理

      AGO APP(Affinity Purification by Peptides) smallRNA芯片利用特异性结合AGO1-4蛋白的T6B-coupled GST beads富集结合AGO1-4的smallRNA[7],包括miRNA、tsRNA、Agotron等,进行AGO APP smallRNA芯片筛选,从而获得结合AGO蛋白发挥调控功能的smallRNA(对于AGO结合的蛋白也可同时进行质谱检测)。

      樣本用量:细胞用量>2*10^7个;组织>50mg;血浆血清>2ml。

       

      實驗流程

      1.細胞/组织裂解;

      2.AGO APP富集结合的smallRNA;

      3.SmallRNA 3’去磷酸化,DMSO变性,Cy3C标记;

      4.Arraystar smallRNA芯片杂交;

      5.掃描芯片,进行数据分析;

      6.提供結果報告。

    • 1.差異AGO APP富集的smallRNA注释信息表格

       

       

      2.差異AGO APP富集的smallRNA火山图、散点图、聚类图

           


      3.深入數據分析:smallRNA 靶基因預測及靶基因GO/pathway分析